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    • 专利摘要:
    當前揭露的主題提供了使用1-去氧半乳糖野尻黴素和酶替代療法用於治療法布裡病的給藥方案和服藥日程。當前揭露的主題進一步提供了使用米加司他鹽酸鹽和阿加糖酶用於治療法布裡病的給藥方案和服藥日程。
    公开号:TW201302197A
    申请号:TW101108345
    申请日:2012-03-12
    公开日:2013-01-16
    发明作者:Douglas Stuart Greene；Kenneth Joseph Valenzano
    申请人:Amicus Therapeutics Inc；
    IPC主号:A61K31-00
    专利说明:
    治療法布裡病之給藥方案相關申請的交叉引用
    本申請要求以下美國臨時申請序號的優先權：於2011年3月11日提交的61/451,798；於2011年12月20日提交的61/578,201以及於2012年2月7日提交的61/596,165，它們揭露的全部內容藉由引用結合在此。
    本申請提供了使用1-去氧半乳糖野尻黴素和酶替代療法治療法布裡病的給藥方案和服藥日程。
    法布裡病係一進行性的X-連鎖的先天性糖鞘脂代謝缺陷，是由作為α-Gal A基因(GLA)突變的結果的在溶酶體酶α-半乳糖苷酶A(α-Gal A)方面的缺乏造成的。儘管是X-連鎖疾病，女性可能表現出不同程度的臨床表現。法布裡病係一罕見的疾病，發生率估計在40,000分之一的男性發病至117,000分之一的一般人群發病。而且，存在著可能在診斷標準以下的法布裡病的遲發表型變異體，因為它們沒有呈現出典型的體征和症狀。這種情況以及新生兒篩查法布裡病的研究表明法布裡病的實際發生率可能高於目前的估計。
    這種疾病的臨床表現可能與殘留α-Gal A水平相關。如果不治療，法布裡病人的預期壽命減少，通常在四十歲或五十歲左右由於影響腎臟、心臟和/或中樞神經系統的血管疾病而死亡。酶缺乏導致底物，球形三醯神經醯胺(GL-3)，在全身血管內皮和內臟組織中的細胞內累積。由於糖鞘脂沉積，腎功能逐步衰退和氮質血症的發生通常在生命的三十歲至五十歲時發生，但是也可能早在二十歲就發生。腎損傷在半合子(男性)和雜合子(女性)病人中都有發現。
    心臟疾病出現在大部分男性和許多女性中。早期的心臟所見包括左心室增大、心瓣膜受累以及傳導異常。二尖瓣關閉不全是典型存在于兒童或青少年中的最常見的瓣膜損傷。腦血管表現主要來自多病灶小血管受累並且可能包括血栓、短暫腦缺血發作、基底動脈缺血和動脈瘤、癲癇發作、偏癱、偏身麻木、失語症、迷路病症或腦出血。腦血管表現的平均發作年齡為33.8歲。可能隨著年齡增長而表現出人格改變和精神病行為。
    目前認可的法布裡病的治療方法為酶替代療法(“ERT”)。兩種有α-GAL A產品目前用於治療法布裡病：阿加糖酶α(Replagal®，Shire Human Genetic Therapies)和阿加糖β(Fabrazyme®，)。這兩種形式的ERT旨在用靜脈內給予重組酶形式來補償病人不足的α-Gal A活性。儘管ERT在一些情況下有效，但是這種治療也有局限性。沒有證實ERT降低中風的風險，心肌反應緩慢，並且GL-3從一些腎臟細胞類型中消除受到限制。一些病人對ERT產生免疫反應。
    1-去氧半乳糖野尻黴素及其鹽，1-去氧半乳糖野尻黴素鹽酸鹽(被美國採用的名稱(USAN)也被稱為米加司他鹽酸鹽)藉由選擇性地與酶結合作為突變體α-Gal A的藥物分子伴侶，因此增加其穩定性並且幫助酶折疊成正確的三維形狀。α-Gal A的穩定允許細胞質量控制機制識別正確折疊的酶以便增加酶運輸到溶酶體，使得它實現其預期的生物功能，即代謝GL-3。作為α-Gal A恢復從ER到溶酶體的正確運輸的結果，米加司他鹽酸鹽還降低了ER中的錯誤折疊的蛋白質的累積，這可以緩解細胞壓力和炎症樣反應(它們可能是法布裡病的促成因素)。已經進行了米加司他鹽酸鹽的多個體外和體內臨床前研究以及臨床研究。米加司他鹽酸鹽已經顯示出增加細胞內α-Gal A蛋白的量並且增強突變體酶向溶酶體的轉運。
    本申請提供了使用1-去氧半乳糖野尻黴素和酶替代療法治療法布裡病的一給藥方案和服藥日程。在一些實施方式中，本申請提供了使用米加司他鹽酸鹽和阿加糖酶(例如阿加糖酶α或阿加糖酶β)治療法布裡病的一給藥方案和服藥日程。
    在一實施方式中，該方法包括向對其有需要的病人給予從大約50 mg至大約600 mg的1-去氧半乳糖野尻黴素和有效量的α-Gal A酶替代療法。1-去氧半乳糖野尻黴素可以在α-Gal A酶替代療法之前、之後或同時給予。在一實施方式中，病人在服用1-去氧半乳糖野尻黴素開始之前大約0.5至大約4小時以及在服用1-去氧半乳糖野尻黴素結束之後大約0.5至大約4小時的一段時間內禁食。在另一實施方式中，病人在服用1-去氧半乳糖野尻黴素之前至少大約2小時並且在服用1-去氧半乳糖野尻黴素之後至少大約2小時禁食。
    在另一實施方式中，在給予α-Gal A酶替代療法的同時至給予α-Gal A酶替代療法之前大約4小時之間(從T=-4小時至T=0小時)給予1-去氧半乳糖野尻黴素。在另一實施方式中，給予α-Gal A酶替代療法之前大約2小時給予1-去氧半乳糖野尻黴素。
    在一特別實施方式中，1-去氧半乳糖野尻黴素係米加司他鹽酸鹽。在一實施方式中，α-Gal A酶替代療法係阿加糖酶α或阿加糖酶β。
    在一實施方式中，1-去氧半乳糖野尻黴素作為α-Gal A酶替代療法的佐劑。在另一實施方式中，1-去氧半乳糖野尻黴素和α-Gal A酶替代療法作為聯合治療而給予。
    在一具體的實施方式中，根據以上描述的方法所給予的1-去氧半乳糖野尻黴素的量係從大約150 mg至大約450 mg。在一實施方式中，所給予的1-去氧半乳糖野尻黴素的量選自150 mg、300 mg和450 mg。
    在一具體的實施方式中，1-去氧半乳糖野尻黴素剛好在α-Gal A酶替代療法之前或同時使用。在一可供選擇的實施方式中，1-去氧半乳糖野尻黴素的第二次劑量在給予α-Gal A酶替代療法和其後4小時之間給予。
    在某些實施方式中，對也接受α-Gal A酶替代療法的病人每一至四周給予一次1-去氧半乳糖野尻黴素。在一另外的實施方式中，對也接受α-Gal A酶替代療法的病人每12至16天給予一次1-去氧半乳糖野尻黴素。在一另外的實施方式中，對也接受α-Gal A酶替代療法的病人每14天給予一次1-去氧半乳糖野尻黴素。在一些實施方式中，對也給予1-去氧半乳糖野尻黴素作為聯合治療或輔助治療的病人每14天給予一次α-Gal A酶替代療法。
    本申請還提供了1-去氧半乳糖野尻黴素用於治療法布裡病的用途，其中該治療包括向對其有需要的人類受試者給予從大約50 mg至大約600 mg的1-去氧半乳糖野尻黴素和有效量的α-Gal A酶替代療法。
    本申請還提供了1-去氧半乳糖野尻黴素在製備治療法布裡病的藥劑中的用途，其中該治療包括向對其有需要的人類受試者給予從大約50 mg至大約600 mg的1-去氧半乳糖野尻黴素和有效量的α-Gal A酶替代療法。
    本申請還提供了用於治療受試者中的法布裡病的一藥盒，該藥盒包括從大約50 mg至大約600 mg的1-去氧半乳糖野尻黴素和有效量的α-Gal A酶替代療法。在一些實施方式中，藥盒中的1-去氧半乳糖野尻黴素的量選自150 mg、300 mg和大約450 mg。 【圖式簡單說明】
    圖1顯示了在時期1和時期2期間單獨用0.5 mg/kg或1.0 mg/kg的阿加糖酶β治療(時期1)或與150 mg米加司他聯合治療(時期2)的病人的血漿α-Gal A活性複合。
    圖2顯示了與米加司他同時給予後的所有病人的血漿α-Gal A活性AUC增加。
    圖3顯示了每個取樣時間的部分AUC，其顯示了同時給予0.5 mg/kg或1.0 mg/kg阿加糖酶β和150 mg米加司他的血漿α-Gal A活性的增加。
    圖4A-B顯示了在同時給予0.5 mg/kg阿加糖酶β與150 mg米加司他後的兩位病人中的皮膚α-Gal A活性的增加。
    圖5A-B顯示了在同時給予0.5 mg/kg阿加糖酶β與150 mg米加司他後的兩位病人中皮膚α-Gal A活性的增加。圖5A顯示了在時期2過程中接受了40分鐘較長ERT輸注的病人中同時給予0.5 mg/kg阿加糖酶β與150 mg米加司他之後皮膚α-Gal A活性的增加。
    圖6A-B顯示了在1.0 mg/kg阿加糖酶β與150 mg米加司他聯合使用後的兩位病人中皮膚α-Gal A活性的增加。
    圖7A-B顯示了在0.5 mg/kg阿加糖酶β與150 mg米加司他聯合使用後的兩位病人中PBMC(外周血單核細胞)α-Gal A活性的增加。
    圖8A-B顯示了在0.5 mg/kg阿加糖酶β與150 mg米加司他同時給予之後的兩位病人中的PBMC α-Gal A活性的增加。
    圖9A-B顯示了在1.0 mg/kg阿加糖酶β與150 mg米加司他同時給予給予之後的兩位病人中PBMC α-Gal A活性的增加。
    圖10顯示的表總結了在0.5 mg/kg或1.0 mg/kg阿加糖酶β與150 mg米加司他同時給予之後的血漿、皮膚和PMBC中的α-Gal A活性的增加。
    圖11顯示了實例2和3的每個研究物件的基因型。
    圖12顯示了用1.0 mg/kg阿加糖酶β治療，以及用1.0 mg/kg阿加糖酶β和150 mg米加司他鹽酸鹽聯合治療相對比的血漿AUC α-Gal A活性(具有插入均值和標準差)。
    圖13顯示了用0.5 mg/kg阿加糖酶β治療，以及用0.5 mg/kg阿加糖酶β和150 mg米加司他鹽酸鹽聯合治療相對比的血漿AUC α-Gal A活性(具有插入均值和標準差)。
    圖14顯示了單獨用阿加糖酶β治療或者與150 mg米加司他鹽酸鹽聯合治療後的第二天的皮膚α-Gal A活性(從單獨用阿加糖酶β的基線扣除比率)。
    圖15顯示了單獨用阿加糖酶β治療或者與150 mg米加司他鹽酸鹽聯合治療後的第七天的皮膚α-Gal A活性(從單獨用阿加糖酶β的基線扣除比率)。 詳細說明
    本申請提供了使用1-去氧半乳糖野尻黴素和阿加糖酶治療法布裡病的給藥方案和服藥日程。 定義
    “法布裡病”係指典型的法布裡病、遲發法布裡病以及具有在編碼α-半乳糖苷酶A(α-Gal A)基因中的突變的半合子女性。術語“法布裡病”，如此處所用，進一步包括受試者顯示出低於正常內源α-Gal A活性的任何情況。
    術語“AUC”代表評估人體隨著時間的過去對一給定藥物的總暴露的數學計算。在繪製給藥後血液中的濃度如何的圖中，藥物濃度變數位於y軸上，並且時間位於x軸上。在一指定的時間間隔之內，藥物濃度曲線和x軸之間的面積係AUC。AUC被用作給藥方案和比較身體內不同藥物的利用度的指導。
    術語“Cmax”代表給藥後達到的最大血漿濃度。
    術語“治療有效劑量”和“有效量”係指足以帶來有益的治療反應的具體藥物化合物或組合物的量。有益的治療反應可以是用戶(例如臨床醫生)識別為針對治療的有效反應的任何反應，包括先前症狀和代替臨床標記。因此，治療反應通常是一疾病或失調(例如法布裡病)的一或多種症狀的改善，如本領域中對該疾病或失調(例如法布裡病)已知的那些。
    法布裡病的替代標記中改善的非限制實例包括細胞(例如成纖維細胞)和組織中的α-GAL水平或活性的增加；使用組織學藉由被測量為在腎臟間質毛細血管活組織檢查中的變化的GL-3累積的減少；降低的尿GL-3水平；腎功能評定(包括腎小球濾過率(GFR)和24小時尿蛋白)；高半胱氨酸和血管細胞粘附分子-1(VCAM-1)的血漿濃度的降低；在心肌細胞和瓣膜纖維細胞內的GL-3累積的減少；心臟(尤其是左心室)肥大的減輕、瓣膜關閉不全以及心律不齊的改善；蛋白尿的減輕，脂質(例如CTH、乳糖神經醯胺、神經醯胺)的尿濃度的降低和葡萄糖神經醯胺和鞘磷脂尿濃度的增加(Fuller等人，Clinical Chemistry(臨床化學)。2005；51：688-694)；腎小球上皮細胞中分層包涵體(斑馬小體)的缺乏；腎功能的改善；少汗症的緩解；血管角化瘤的缺乏；以及聽力異常(如高頻感音神經性耳聾、進行性耳聾、突發性耳聾或耳鳴)的改善。神經症狀的改善包括短暫性腦缺血發作(TIA)或中風的預防；以及表現為自身肢端感覺異常(肢端燒灼或麻刺感)的神經性疼痛的改善。
    短語“藥學上可接受”係指生理學可耐受的並且當給予人時不會典型地產生不良反應的分子實體和組合物。優選地，如在此所用，術語“藥學上可接受”表示聯邦或州政府的管理機構批准的或者在美國藥典或其他普遍認可的藥典中列出的在動物體內並且更特別地在人體內的使用。術語“載體”係指與被給予的化合物一起使用的稀釋劑、助劑、賦形劑或賦形物。該等藥學載體可以是無菌液體，如水和油類。水或水溶液鹽水溶液和含水葡萄糖和甘油溶液優選被用作載體，特別針對是注射溶液而言。適當的藥學載體在E.W.Martin編寫的第18版或其他版的“雷明頓藥物科學”中進行了描述，其全部內容藉由引用結合在此。
    “1-去氧半乳糖野尻黴素”(DGJ)係指(2R,3S,4R,5S)-2-(羥甲基)呱啶-3,4,5-三醇。如在此使用的，全篇引用的“1-去氧半乳糖野尻黴素”或“DGJ”包括游離堿以及任何其藥學上可接受的鹽的形式。DGJ的鹽酸鹽已知是米加司他鹽酸鹽。
    術語“助劑”或“輔助治療”係指用於增加療效、安全性或另外促進或增強基本物質、治療或過程的性能的任何其他物質、治療或過程。
    術語“聯合治療”指的是與每種治療單獨進行時的效果相比其結果被增強的任何治療。在聯合治療中的單獨療法可以同時給予或連續給予。
    增強可以包括，與單獨進行該等療法時達到的結果相比，可能帶來有利結果的不同療法的任何效應的改進。增強效應和增強效應的確定可以藉由不同的參數來測量，例如但不限於：時間參數(例如療程的長度、恢復時間、治療的遠期效應或治療的可逆性)；生物學參數(例如細胞數、細胞容積、細胞組分、組織容積、組織大小、組織成分)；空間參數(例如組織強度、組織大小或組織可及性)以及生理參數(例如身體輪廓、疼痛、不適、恢復時間或可見標記)。增強效應可以包括協同增強，其中增強效應高於單獨進行每種療法的相加效應。增強效應可以包括相加增強，其中增強效應實質上等於單獨進行每種療法的相加效應。增強效應可以包括小於協同效應，其中增強效應低於單獨進行每種療法的相加效應，但是仍然好於單獨進行每種療法的效應。
    術語“大約”和“大致”一般是指在給定的測量的性質或準確性下測得的數量的誤差可接受的程度。典型地，示例性的誤差程度在給定的數值或數值範圍的20%以內，優選在10%以內，並且更加優選在5%以內。可替代地，並且特別是在生物系統中，術語“大約”和“大致”表示在一數量級之內的數值，優選在一給定數值的5倍並且更加優選在2倍之內。在此給出的數值的數量係近似值，除非另外說明。 配方和給藥
    1-去氧半乳糖野尻黴素可以作為游離堿或作為藥理學上可接受的鹽形式給予，包括1-去氧半乳糖野尻黴素鹽酸鹽(另外的名字是米加司他鹽酸鹽)。可以按適合於任何給藥途徑的形式給予，包括例如口服片劑、膠囊、或液體、或無菌注射水溶液的形式。可以按片劑、膠囊、卵形栓劑(ovule)、酏劑或、溶液或懸浮液、凝膠類、糖漿類、口腔洗劑，或使用之前用水或其他合適的賦形物構造的乾粉的形式給予，任選地用調味劑和調色劑用於即時、延緩、改性、持續、脈衝或控制釋放應用。還可以使用固體組合物，如片劑、膠囊、錠劑、軟錠劑、丸劑、推注劑、粉末、糊劑、顆粒劑、栓劑(bullet)、或預混製劑。口服使用的固體和液體組合物可以根據本領域熟知的方法製備。該等組合物還可以包含一或多種藥學上可接受的處於固體或液體形式的載體和賦形劑。當化合物按配方製造供口服使用時，可以藉由常規方式製備片劑或膠囊，使用藥學上可接受的賦形劑，如粘合劑(例如預膠凝澱粉、聚乙烯比咯烷酮或羥丙基甲基纖維素)；填充劑(例如乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣)；潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石或二氧化矽)；崩解劑(例如馬鈴薯澱粉或澱粉羥乙酸鈉)；或濕潤劑(例如十二烷基硫酸鈉)。可以使用本領域熟知的方法來包被片劑。
    藥學上可接受的賦形劑還包括但不限於：微晶纖維素、乳糖、枸櫞酸鈉、碳酸鈣、磷酸氫鈣和甘氨酸，崩解劑如澱粉(優選玉米、馬鈴薯或木薯澱粉)、澱粉羥乙酸鈉、交聯羧甲基纖維素鈉和某些複合矽酸鹽類，以及顆粒粘合劑如聚維酮、羥丙基乙基纖維素(HPMC)、羥丙纖維素(HPC)、蔗糖、明膠和阿拉伯膠。另外，可以包括潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸、甘油二十二烷酸酯和滑石。
    在一具體的實施方式中，用硬脂酸鎂和預膠凝澱粉將米加司他鹽酸鹽配製在白色的硬膠囊中。在另一實施方式中，固體劑型包括大約75%-80%的米加司他鹽酸鹽、大約0.1%-2%的硬脂酸鎂和大約20%-25%的預膠凝澱粉。在另外一具體的實施方式中，膠囊包括大約76.5%的米加司他鹽酸鹽、大約0.5%的硬脂酸鎂和大約23%的預膠凝澱粉。 酶替代療法
    目前批准的用於治療法布裡病的方法係酶替代療法。目前有兩種產品用於治療法布裡病：阿加糖酶α(Replagal®，Shire Human Genetic Therapies)和阿加糖酶β(Fabrazyme®；Genzyme公司)，全球都已上市。這兩種形式的ERT旨在用於靜脈給予重組酶形式來補償病人不足的α-Gal A活性。已經證實ERT能減少腎臟的毛細血管內皮和某些其他細胞類型中的GL-3沉積。雖然ERT在許多情況下是有效的，這種治療還是有限制的。沒有證實ERT能減少中風的風險，心肌反應緩慢，並且GL-3從腎臟的一些細胞類型中的消除受到限制。一些病人對ERT產生免疫反應。
    阿加糖酶α的推薦劑量係0.2 mg/kg體重，作為一靜脈輸液每2周輸注一次。在ERT初次試驗的成年男性法布裡病病人中進行了一個10周的研究來評估阿加糖酶α的藥代動力學和藥效學。給予從0.1至0.4 mg/kg劑量範圍的阿加糖酶α之後的平均半衰期係56-76分鐘，在劑量與半衰期、清除率或分佈容積之間沒有顯著的關聯。在這個劑量範圍內AUC與劑量成線性比例。在所有劑量組中的血漿GL-3水平降低大約50%；降低不依賴於劑量和給藥頻率。在本研究過程中18位病人中的兩位成為IgG陽性。在本研究過程中在任何病人中未檢測到IgE抗體。
    阿加糖酶β的推薦劑量係1 mg/kg體重，作為一靜脈輸液每2周輸注一次。阿加糖酶β的生產商已經宣佈了藥品短缺，這係唯一的美國批准的用於法布裡病的ERT。作為結果，阿加糖酶β目前定量配給並且病人典型地接受減少的酶劑量和/或延長的給藥間隔(即給藥間隔超過2周)。阿加糖酶β顯示出非線性藥物動力學，其中隨著劑量的增加，暴露(AUC)值增加並且清除率不相稱地降低。當劑量分別從0.3 mg/kg增加至1 mg/kg以及從1 mg/kg增加至3 mg/kg時，AUC值分別大約增加6倍和8倍。在從0.3 mg/kg至3 mg/kg範圍內給藥之後，成年病人中的阿加糖酶β的消除半衰期係劑量依賴的並且在從45至100分鐘的範圍。
    在臨床研究中，用阿加糖酶治療的79%的成年病人和69%的兒科病人產生了針對阿加糖酶β的IgG抗體；產生了IgG抗體的大部分病人在暴露的前3個月之內如此。男性，特別是那些具有較低殘留α-Gal A水平的男性，比那些具有較高殘留水平的男性或比女性更有可能產生IgG抗體。兒科病人中的IgG血清轉換與延長的阿加糖酶半衰期有關。但是，成年病人中，在一試驗中在血清轉換之前和之後觀察到相同的阿加糖酶藥代謝動力學類型；在另一試驗中，在具有最高IgG效價的病人中最大阿加糖酶濃度和AUC值降低一直到基線值的26%。已經報導針對阿加糖酶的IgG抗體的出現會降低酶的活性。
    在體外以及在體內，米加司他鹽酸鹽使野生型α-Gal A穩定。已經體外證實米加司他鹽酸鹽結合至rhα-Gal A導致顯著的在中性pH的rhα-Gal A的穩定方面的時間和濃度依賴增加，正如藉由熱變性和藉由活性所測量。在一中性pH緩衝劑中，rhα-Gal A顯示出具有大致3小時的半衰期的活性損失；與米加司他鹽酸鹽共孵育將rhα-Gal A活性損失的半衰期增加至大致40小時。
    在大鼠中，口服3 mg/kg米加司他鹽酸鹽，隨後在30分鐘後注射10 mg/kg阿加糖酶β，導致rhα-Gal A的血漿半衰期增加2.6倍，並且在60和240分鐘時血漿α-Gal A水平分別增加2.5和1.5倍。在GLA缺乏的小鼠中，在注射rhα-Gal A之前30分鐘和注射rhα-Gal A之後2小時口服30、100或300 mg/kg劑量的米加司他鹽酸鹽，與單獨服用rhα-Gal A相比，導致在組織α-Gal A水平上的劑量依賴性增加以及在皮膚、心臟、腎臟和血漿中的GL-3水平的劑量依賴性降低。
    體外和體內都已經顯示米加司他鹽酸鹽使阿加糖酶α穩定。用一項體外研究熱變性分析評估了米加司他鹽酸鹽對阿加糖酶α的物理穩定性的作用。使用這個分析，在pH7.4時阿加糖酶α顯示出大致51℃的熔化溫度(Tm)。然而，當在變性反應中包括10 μM的米加司他鹽酸鹽時，阿加糖酶α的Tm實質地增加至59℃。如針對一溶酶體酶所預期的，阿加糖酶α在低pH時更加穩定(Tm在pH 5.2時為58℃)並且在10 μM米加司他鹽酸鹽存在時顯示出對熱變性的進一步抵抗(Tm為68℃)。該等數據表明米加司他鹽酸鹽的結合對阿加糖酶α賦予了高水平的物理穩定性。
    根據雄性Sprague-Dawley大鼠的血液還研究了米加司他鹽酸鹽對阿加糖酶α清除率的作用。動物接受賦形物(水)或單一口服管飼1、3、10或30 mg/kg米加司他鹽酸鹽，接著在30分鐘後藉由尾靜脈推注注射而靜脈給予0.2 mg/kg阿加糖酶α。收集血液作為時間的一函數，測量在血漿中的α-Gal A活性。在缺乏米加司他鹽酸鹽時，α-Gal A活性迅速下降；預先給予米加司他鹽酸鹽，在給予3 mg/kg和30 mg/kg米加司他鹽酸鹽之後，導致阿加糖酶α的半衰期的劑量依賴性分別增加(如藉由α-Gal A活性測量)大致2倍和3倍，在60和240分鐘時血漿α-Gal A活性分別大致增加2.5倍和1.5倍。米加司他鹽酸鹽對於阿加糖酶α的體外和體內作用與米加司他鹽酸鹽對阿加糖酶β的作用中觀察到的相當。
    已經在GLA缺乏的小鼠中進行了一項預研究來評估共同給予米加司他鹽酸鹽和Fabrazyme®的安全性。米加司他鹽酸鹽一周使用三次，共使用四周，劑量為3和30 mg/kg，與一週一次的劑量為1 mg/kg的靜脈給予的Fabrazyme®聯合使用。在共同給予米加司他鹽酸鹽和Fabrazyme®的雄性GLA-缺乏的大鼠中所觀察的在存活、臨床病症或血液學以及在臨床化學參數方面沒有顯示出直接的藥物相關變化。 實例
    實例1：使用米加司他鹽酸鹽和阿加糖酶治療法布裡病的給藥方案
    本研究的一目的係評估包含對法布裡病的患者共同給予米加司他鹽酸鹽和阿加糖酶的給藥方案的安全性、有效性和藥效學。
    本研究的另一目的係評定150 mg和450 mg劑量的米加司他鹽酸鹽對α-Gal A分佈的作用。這可以藉由單獨給予阿加糖酶以及阿加糖酶與米加司他鹽酸鹽聯合給予之後，在給藥後24小時和7天藉由測量α-Gal A水平和蛋白質水平來測量皮膚中的阿加糖酶分佈來評價。
    將評估的其他測量：‧ 每次給予阿加糖酶之前和之後14天的尿GL-3排泄；‧ 單獨給予阿加糖酶和阿加糖酶與米加司他鹽酸鹽聯合給予後，在給藥後24小時和7天在皮膚中的GL-3；‧ 在阿加糖酶開始輸注之前以及在用藥後2、4和24小時以及7天和14天確定的WBC α-Gal A酶水平；‧ 在開始輸注阿加糖酶之前的抗體效價(IgG)；‧ 在每次給予阿加糖酶之前和每次給予阿加糖酶之後14天的血漿球丙糖醯基鞘氨醇(溶解-GB3)濃度和溶解-GB3的尿排泄。所有的α-Gal A酶水平的血漿、WBC和皮膚測量在有和沒有Con A捕獲下進行並且藉由Western印跡法確定蛋白水平。
    研究設計這係一個2期臨床研究、兩個階段、開放標籤研究，用來評定共同給予米加司他鹽酸鹽和阿加糖酶的安全性和有效性。本研究在18和65歲之間的男性受試者中進行，他們在納入研究之前至少一個月已經接受穩定劑量(0.3-10 mg/kg)的阿加糖酶β(Fabrazyme®)或0.2 mg/kg的阿加糖酶α(Raplagal®)。大致納入了18位受試者。
    這個標籤開放研究包括兩個階段。階段1包括篩選和一個三時期研究來評估150 mg的米加司他鹽酸鹽對阿加糖酶的藥代動力學和安全性的影響以及阿加糖酶對150 mg米加司他鹽酸鹽的藥代動力學和安全性的影響。階段2包括篩選和一個兩時期研究來評估450 mg的米加司他鹽酸鹽對阿加糖酶的藥代動力學和安全性的影響。在階段2中，將不評估阿加糖酶對450 mg劑量的米加司他鹽酸鹽的藥代動力學和安全性的影響。當米加司他鹽酸鹽與阿加糖酶一起給予僅僅為了確認達到足夠的米加司他鹽酸鹽血漿濃度時，將表徵米加司他鹽酸鹽的血漿暴露。
    每個受試者將接受以下按順序描述的下列治療中的每一種。階段1將包括以下時期：時期1：阿加糖酶單獨用作靜脈輸注；時期2：在開始靜脈輸注阿加糖酶之前兩個小時口服150 mg的米加司他鹽酸鹽；時期3：口服150 mg的米加司他鹽酸鹽。
    在時期1和2中使用的阿加糖酶的劑量係相等的。阿加糖酶α以40分鐘靜脈輸注給予，阿加糖酶β以2小時靜脈輸注給予。
    對於時期1，在下次計畫的阿加糖酶輸注之前，將對受試者進行以下評定：不良事件評定、合併用藥、體格檢查、體重、生命體征，12-導聯ECG、臨床實驗室試驗(血清化學、血液學和尿分析)、皮膚活組織檢查(鑽取活組織檢查，用於檢測α-Gal A酶水平；如果有足夠的樣品，還將測定皮膚GL-3)。
    在第1天的早晨，收集尿液用於測定尿GL-3和溶解-GB3，之後使用輸注泵以輸液的形式對受試者給予目前的阿加糖酶劑量。剛好在開始輸注阿加糖酶之前以及在開始輸注阿加糖酶之後24小時期間收集用於藥代動力學和藥效學的血樣。按照表2總結的阿加糖酶β和表4總結的阿加糖酶α的時間從收集的血樣測定血漿和WBC α-Gal A酶水平、血漿溶解-GB3和血漿抗體效價。在輸注阿加糖酶結束時，在輸注後血樣收集後立即進行12-導聯ECG檢測。
    在第2天，在前一天的輸注開始後24小時收集鑽取皮膚活組織檢查，由此確定α-Gal A酶水平；如果有足夠的樣品，還可以測定皮膚GL-3。收集完最後藥代動力學樣品之後，進行以下評定：不良事件評定、合併用藥、體格檢查、體重、生命體征和臨床實驗室試驗(血清化學、血液學和尿分析)。
    在第7天，對受試者進行以下評定：體格檢查、生命體征、合併用藥和不良事件評定。收集皮膚活組織檢查，由此測定α-Gal A酶水平；如果有足夠的樣品，還可以測定皮膚GL-3。還收集用於測定WBC α-Gal A和血漿酶水平的血樣。在第14天，收集用於測定尿GL-3和溶解-GB3排泄的尿樣。還收集用於WBC α-Gal A和血漿酶水平測定的血樣並且評估生命體征。
    對於時期2，在下次計畫的輸注阿加糖酶之前，對受試者進行以下評定：不良事件評定、合併用藥、體格檢查、體重、生命體征、12-導聯ECG、臨床實驗室試驗(血清化學、血液學和尿分析)。
    在第1天的早晨，收集尿液用於測定尿GL-3和溶解-GB3，之後在計畫輸注阿加糖酶之前2小時口服給予劑量為150 mg的米加司他鹽酸鹽。受試者在給予米加司他鹽酸鹽之前至少2小時和之後2小時禁食。在時期2中，每位受試者將接受與時期1中使用輸注泵以輸液的形式給予的相等劑量的阿加糖酶。在給予米加司他鹽酸鹽之後2小時開始輸注阿加糖酶。
    在給予米加司他鹽酸鹽之前和給予米加司他鹽酸鹽之後1小時收集用於藥代動力學和藥效學分析的血樣。剛好在開始輸注阿加糖酶之前和輸注阿加糖酶開始後24小時期間收集另外的血樣。按照在表2中總結的阿加糖酶β和在表4中總結的阿加糖酶α的時間從收集的血樣來測定血漿和WBC α-Gal A酶水平、血漿溶解-GB3和血漿抗體效價。在輸注阿加糖酶結束時，剛好在輸注後血樣收集之後進行12-導聯ECG檢測。
    在第2天，在前一天的輸注開始後24小時收集鑽取皮膚活組織檢查，由此確定α-Gal A酶水平；如果有足夠的樣品，還可以測定皮膚GL-3。收集完最後的藥代動力學樣品之後，將進行以下評定：不良事件評定、合併用藥、體格檢查、體重、生命體征和臨床實驗室試驗(血清化學、血液學和尿分析)。
    在第7天，對受試者進行以下評定：體格檢查、生命體征、合併用藥和不良事件評定。收集皮膚活組織檢查，由此測定α-Gal A酶水平；如果有足夠的樣品，還可以測定皮膚GL-3。還收集用於WBC α-Gal A和血漿酶水平檢測的血樣。
    在第14天，收集用於測定尿GL-3和溶解-GB3排泄的尿樣。還收集用於測定WBC α-Gal A和血漿酶水平的血樣並且評定生命體征。
    時期2之後完成所有評定之後，受試者開始時期3。所有的受試者在通常的給藥日程之後的第1天接受下一次阿加糖酶輸注。在第6天，對所有受試者進行以下評定：不良事件評定、合併用藥、體格檢查、體重、生命體征、12-導聯ECG、以及臨床實驗室試驗(血清化學、血液學和尿分析)。
    在第7天，服用口服劑劑量為150 mg的米加司他鹽酸鹽。受試者在服用米加司他鹽酸鹽之前至少2小時和之後2小時禁食。在給予米加司他鹽酸鹽之前和之後24小時期間收集血樣。檢測所有血漿樣品中的米加司他鹽酸鹽濃度(參見表2為接受阿加糖酶β的受試者和表4為接受阿加糖酶α的受試者的樣品收集時間)。
    在第8天，收集完最後的藥代動力學樣品之後，進行以下評定：不良事件評定、合併用藥、體格檢查、生命體征和臨床實驗室試驗(血清化學、血液學和尿分析)。
    時期3的隨訪在時期3之後的28天藉由電話聯繫。進行以下評定：合併用藥和不良事件。
    對於階段2，每位受試者接受以下描述的按順序的治療：時期1：阿加糖酶單獨用作輸注；時期2：在開始靜脈輸注阿加糖酶之前兩個小時口服450 mg的米加司他鹽酸鹽；在時期1和2中使用的阿加糖酶的劑量係相等的。阿加糖酶α以40分鐘靜脈輸注給予，阿加糖酶β以2小時靜脈輸注給予。
    對於時期1，滿足所有合格標準的受試者，在下次計畫的阿加糖酶輸注之前，將進行以下評定：不良事件評定、合併用藥、體格檢查、體重、生命體征、12-導聯ECG、臨床實驗室試驗(血清化學、血液學和尿分析)、皮膚活組織檢驗(鑽取活組織檢查用於檢測α-Gal A酶水平；如果有足夠的樣品，還可以確定皮膚GL-3)。
    在第1天的早晨，收集尿液用於測定尿GL-3和溶解-GB3，之後使用輸注泵對受試者以輸液的形式給予目前的阿加糖酶劑量。剛好在開始輸注阿加糖酶之前以及在開始輸注阿加糖酶之後24小時期間收集用於藥代動力學和藥效學分析的血樣。按照在表3中總結的阿加糖酶β和在表5中總結的阿加糖酶α的時間從收集的血樣來測定血漿和WBC α-Gal A酶水平、血漿溶解-GB3和血漿抗體效價。在輸注阿加糖酶結束時，剛好在收集輸注後血樣後進行12-導聯ECG檢測。
    在第2天，在前一天的輸注開始後24小時收集鑽取皮膚活組織檢查，由此確定α-Gal A酶水平；如果有足夠的樣品，還可以測定皮膚GL-3。收集完最後的藥代動力學樣品之後，進行以下評定：不良事件評定、合併用藥、體格檢查、體重、生命體征和臨床實驗室試驗(血清化學、血液學和尿分析)。
    在第7天，對受試者進行以下評定：生命體征、合併用藥和不良事件評定。收集皮膚活組織檢查，由此測定α-Gal A酶水平；如果有足夠的樣品，還可以測定皮膚GL-3。還收集用於測定WBC α-Gal A和血漿酶水平的血樣。
    在第14天，收集用於測定尿GL-3和溶解-GB3排泄的尿樣。還收集用於WBC α-Gal A和血漿酶水平測定的血樣並且評定生命體征。
    時期2中，在下次計畫的輸注阿加糖酶之前，對受試者進行以下評定：不良事件評定、合併用藥、體格檢查、體重、生命體征，12-導聯ECG、臨床實驗室試驗(血清化學、血液學和尿分析)。
    在第1天的早晨，收集尿液用於測定尿GL-3和溶解-GB3，之後在計畫輸注阿加糖酶之前口服給予劑量為450 mg的米加司他鹽酸鹽。受試者在服用米加司他鹽酸鹽之前至少2小時和之後2小時禁食。在時期2中，每位受試者接受與時期1中以輸液的形式使用輸注泵給予相等劑量的阿加糖酶。在使用米加司他鹽酸鹽之後2小時開始輸注阿加糖酶。
    在給予米加司他鹽酸鹽之前和給予米加司他鹽酸鹽之後1小時收集用於藥代動力學和藥效學分析的血樣。剛好在開始輸注阿加糖酶之前和輸注阿加糖酶開始後24小時期間收集另外的血樣。按照在表3中總結的阿加糖酶β和在表5中總結的阿加糖酶α的時間從收集的血樣來測定血漿和WBC α-Gal A酶水平、血漿溶解-GB3和血漿抗體效價。在輸注阿加糖酶結束時，剛好在輸注後血樣收集後進行12-導聯ECG檢測。
    在第2天，在前一天的輸注開始後24小時收集鑽取皮膚活組織檢查，由此確定α-Gal A酶水平；如果有足夠的樣品，還可以測定皮膚GL-3。在收集完最後的藥代動力學樣品之後，進行以下評定：不良事件評定、合併用藥、體格檢查、體重、生命體征和臨床實驗室試驗(血清化學、血液學和尿分析)。
    在第7天，對受試者進行以下評定：生命體征、合併用藥和不良事件評定。收集皮膚活組織檢查，由此測定α-Gal A酶水平。也收集用於測定WBC α-Gal A和血漿酶水平的血樣。
    在第14天，收集用於測定尿GL-3和溶解-GB3排泄的尿樣。還收集用於WBC α-Gal A和血漿酶水平測定的血樣並且評定生命體征。
    隨訪在時期2之後的28天進行。進行以下評定：合併用藥和不良事件。
    評定和樣品採集計畫。表1顯示了階段1和2的評定計劃表。用於米加司他鹽酸鹽與Fabrazyme®聯合給予的樣品收集時間和分析物顯示在表2和3中。用於米加司他鹽酸鹽與Replagal®聯合給予的樣品收集時間和分析物顯示在表4和5中。

    表3：FABRAZYME(阿加糖酶β)-階段2：血液、尿液以及皮膚收集時間和樣品分析

    米加司他鹽酸鹽以及rhα-Gal A藥代動力學
    使用確認的LC-MS/MS分析以血漿的形式來測量血樣中的米加司他鹽酸鹽的濃度。使用4-MUG藉由確認的測量酶活性的分析(有和沒有Con A)來測定血漿中的α-Gal A水平。使用抗人Gal A抗體藉由Western印跡法來檢測α-Gal A蛋白水平。
    皮膚中的α-Gal A酶水平。檢查在皮膚活檢組織樣品中的α-Gal A酶水平。使用一“鑽取”設備來進行皮膚活組織檢查。每次進入(visit)就取出一片。使用4-MUG藉由確認的測量酶活性的分析(有和沒有Con A)來測定皮膚中的α-Gal A水平。使用抗人Gal A抗體藉由Western印跡法來測定α-Gal A蛋白水平。
    WBC中的α-Gal A水平。使用4-MUG藉由確認的測量酶活性的分析(有和沒有Con A)來測定WBC中的α-Gal A水平。使用抗人Gal A抗體藉由Western印跡法來檢測α-Gal A蛋白水平。
    血漿溶解-GB3。血漿溶解-GB3的檢測在探查基礎上進行，從而獲得僅接受ERT以及ERT與米加司他鹽酸鹽聯合給予的病人的數據。使用確認的分析來檢測血漿中的溶解-GB3濃度。
    尿GL-3和溶解-GB3。在時期1和2的第1天和第14天從每位受試者收集早晨第一次排泄尿樣用於分析尿GL-3和溶解-GB3排泄。受試者在第1天和第14天的早晨收集尿。將尿GL-3和尿溶解-GB3表示為尿肌酐濃度的函數。
    抗體效價。收集血樣，檢測在每個血樣中的IgG抗體效價。
    安全性參數。藉由評述體格檢查所見、生命體征、ECG隨時間的變化、臨床實驗室和不良事件方面的變化來評定安全性參數。
    生命體征、體重和身高。在篩查和登記時檢測身體體溫和呼吸。為了監測安全性，在給予阿加糖酶(時期1)或米加司他鹽酸鹽(時期2和3)之前和之後大約1、2、3、4和6小時以及在第2、7和14天，測量體溫、呼吸、坐位血壓和心率。如果生命體征監測的時間與抽血時間同時，則抽血優先並且相應地調整生命體征監測。
    ECG監測。用標準12導聯ECG進行ECG監測。
    臨床實驗室試驗。在每次就診時收集用於臨床實驗室試驗(血液學、血清化學)和尿分析的血樣並且在中心實驗室分析。血液學試驗包括總血紅蛋白、血細胞比容、紅細胞、血小板和白細胞分類計數。
    ‧ 血凝固(僅篩查)包括INR和aPTT。
    ‧ 血清化學包括檢測AST、ALT、鹼性磷酸酶、總膽紅素、肌酐、尿素、葡萄糖、鈣、鈉、鉀、鎂、總蛋白、白蛋白、碳酸氫鹽、LDH、血尿素氮、氯化物和磷酸鹽。使用已經標稱至同位素稀釋質譜法(IDMS)參考方法的試劑來進行血清肌酐的檢測。
    ‧ 尿分析包括顏色、外觀、比重、pH、蛋白質、葡萄糖、酮類、血、白細胞酯酶、亞硝酸鹽、膽紅素、尿膽素原和尿沉渣顯微鏡檢。
    藥代動力學參數。根據血漿米加司他鹽酸鹽濃度和α-Gal A酶水平來計算AUC0-t、AUC無限、Cmax、tmax、kel和半衰期等非房室(non-compartmental)藥代動力學參數。使用描述性統計按照治療總結藥代動力學參數。計算每種化合物單獨對各自化合物組合的AUC0-t、AUC無限比例。單獨分析接受阿加糖酶和阿加糖酶的那些受試者的藥代動力學和藥效學數據。
    統計分析。在適當時將提供描述性分析(N、均值、標準差、和變異係數、標準誤差、中位數、最小值和最大值)。藉由計算個體(按照受試者)AUC和Cmax比率來評估化合物對聯合給予的化合物的影響，如下：AUC和Cmax比率表示為個體比率的均值和均值的90%置信區間。分開分析接受阿加糖酶α和阿加糖酶β的受試者的藥代動力學和藥效學數據。在恰當時以清單和圖形形式來呈現結果。接受研究用藥並且具有產生可靠藥代動力學參數的足夠數據的所有受試者將被納入安全性和藥代動力學分析中。 實例2 使用米加司他鹽酸鹽和阿加糖酶治療法布裡病的給藥方案
    米加司他鹽酸鹽係α-半乳糖苷酶A(α-Gal A)的藥物分子伴侶，其增加了酶的穩定性和正確折疊。米加司他藉由在血液的pH/溫度條件下穩定酶來預防-Gal A失活而起作用。本研究的目的係表徵給予阿加糖酶之前2小時給予的150 mg和450 mg米加司他對法布裡病受試者的安全性和阿加糖酶的血漿藥代動力學的影響。本研究的目的還在於，表徵150 mg和450 mg米加司他對法布裡病病人的血漿、皮膚和PBMC阿加糖酶的血漿藥代動力學的影響；表徵血漿阿加糖酶對米加司他的血漿藥代動力學的影響；評估輸注阿加糖酶之前和之後14天的尿GL-3和血漿和尿溶解-GB3；以及評定輸注阿加糖酶之前的抗體效價。
    方法。根據實例1中描述的方法來進行本研究。具體地說，這係一標籤開放、單劑量、非隨機、固定順序、2-階段的研究。階段1包括3個時期：(1)阿加糖酶β 0.5 mg/kg或1.0 mg/kg(輸注大約2小時)或阿加糖酶α 0.2 mg/kg(輸注大約40分鐘)酶替代單一療法(ERT)；(2)ERT+150 mg米加司他口服片劑(單一劑量)聯合給予，在ERT之前2小時給予米加司他；以及(3)150 mg米加司他單一療法。
    階段2包括與階段1相同順序的2個時期(即，時期(1)和(2))，但是在時期2中使用3 x150 mg米加司他口服片劑聯合給予(即，450 mg米加司他)。階段2包括以下2個時期：(1)阿加糖酶β 0.5 mg/kg或1.0 mg/kg(輸注大約2小時)或阿加糖酶α 0.2 mg/kg(輸注大約40分鐘)酶替代單一療法(ERT)；和(2)ERT+450 mg米加司他口服片劑聯合給予。在ERT之前2小時給予米加司他。
    治療時期用最小的14天洗脫期分開。
    α-Gal A催化體內底物GL-3的分解中的第一步。α-Gal A以相同的α-鍵對其他底物(如人工低分子量螢光底物，4-MUG)起作用。在連續稀釋以解離米加司他之後，體外檢測了來自血漿、皮膚和PBMC樣品的α-Gal A對4-MUG的活性。
    評估了具有來自階段1、時期1和2的血漿、皮膚和PMBC的α-半乳糖苷酶A活性的6位病人。在時期1中四位病人接受了0.5 mg/kg阿加糖酶β ERT，兩位病人接受了1.0 mg/kg阿加糖酶β ERT，並且在時期2中開始相同劑量的ERT之前2小時聯合給予150 mg米加司他。兩個時期中的輸注持續時間都是2個小時，只有一個例外：接受0.5 mg/kg阿加糖酶β的一位病人具有不平衡的輸注，其中該病人在時期2過程中輸注了2小時40分鐘，但是在時期1過程中僅輸注了2小時。
    結果
    血漿α-Gal-A活性隨著米加司他的聯合給予而增加
    相對於單獨的ERT(時期1)而言聯合給予米加司他(時期2)，觀察到以下的在血漿α-Gal A活性AUC(曲線下面積)方面的均值增加：針對0.5 mg/kg阿加糖酶β輸注的均值增加：
    ‧ 針對0.5 mg/kg阿加糖酶β的3.0倍(N=4)
    個體病人增加：2.0、2.2、3.4和4.2倍
    排除具有不平衡輸注持續時間的2.0倍的病人的均值增加：3.3倍針對1.0 mg/kg阿加糖酶β輸注的均值增加：
    ‧ 針對1.0 mg/kg阿加糖酶β的1.9倍(N=2)
    個體病人增加：1.6倍和2.2倍
    針對時期1和時期2的六位病人的血漿α-Gal A活性複合顯示於圖1中。聯合給予米加司他之後所有病人的血漿-Gal A活性AUC增加顯示於圖2中。圖3顯示了每次取樣時間的部分AUC，其顯示了聯合給予0.5 mg/kg或1.0 mg/kg阿加糖酶β和150 mg米加司他後增加的活性(血漿-Gal A活性)。
    皮膚α-Gal-活性隨著米加司他增加
    相對於單獨的ERT(時期1)的具有米加司他的聯合給予(時期2)，觀察到以下的在皮膚α-Gal A活性方面的均值增加：
    0.5 mg/kg阿加糖酶β輸注的均值增加：
    ‧ 針對0.5 mg/kg阿加糖酶β在第2天的2.6倍(N=3，1位病人丟失了一份樣品)
    個體病人增加：2.8、3.9和1.1倍
    時期1的在第7天皮膚活性沒有變化
    針對1.0 mg/kg阿加糖酶β輸注的均值增加：
    ‧ 針對1.0mg/kg阿加糖酶β在第2天和第7天分別是1.9倍和1.5倍(N=2)
    個體病人增加：在第2天1.6倍和2.1倍，在第7天1.7倍和1.2倍
    聯合給予0.5 mg/kg或1.0 mg/kg阿加糖酶β和150 mg米加司他之後的皮膚α-Gal A活性的增加顯示於圖4-6中。圖5A顯示了在時期2過程中接受比其他病人長40分鐘ERT輸注的病人中聯合給予0.5 mg/kg阿加糖酶β和150 mg米加司他之後的皮膚α-Gal A活性的增加。
    PBMC α-Gal-A活性隨著米加司他而增加
    相對於單獨的ERT(時期1)的米加司他的聯合給予(時期2)，觀察到以下的在PBMC α-Gal A活性方面的均值增加：針對0.5 mg/kg阿加糖酶β輸注的均值增加：
    ‧ 針對0.5 mg/kg阿加糖酶β在第2、7和14天分別為2.3、2.0和2.2倍(N=4)
    個體病人增加範圍：在第2、7和14天分別為1.4-3.1、1.4-2.3和1.7-2.8倍
    時期1在第7天皮膚活性沒有變化
    針對1.0 mg/kg阿加糖酶β輸注的均值增加：
    ‧ 1.0mg/kg阿加糖酶β在第2、7和14天分別為1.8、4.8和3.5倍(N=2)
    個體病人增加：在第2、7和14天分別為1.1和2.5、3.6和6.0以及1.7和5.4倍
    聯合給予0.5 mg/kg或1.0 mg/kg阿加糖酶β和150 mg米加司他之後PBMC α-Gal A活性的增加顯示於圖7-9中。
    結論
    150 mg米加司他與0.5 mg/kg和1.0 mg/kg阿加糖酶β的相互作用導致以下α-Gal A活性增加：
    所有病人的血漿α-Gal A AUC(N=6)
    在第2天所有病人的皮膚α-Gal A(N=5)，但是在第7天5位病人中僅有3位
    在第2、7和14天所有病人的PBMC α-Gal A(N=6)
    相對于單獨的阿加糖酶β，150 mg米加司他與0.5 mg/kg和1.0 mg/kg阿加糖酶β的相互作用導致α-半乳糖苷酶A活性AUC增加2至4倍，在第2天皮膚α-半乳糖苷酶A活性增加1.1至3.9倍，以及在第2、7和14天PBMC α-半乳糖苷酶A活性增加1.1至6.0倍。在第7天，聯合給予之後四位病人在皮膚中具有增加的α-半乳糖苷酶A活性。
    150 mg米加司他劑量增加了血漿、皮膚和PBMC中的酶活性，對於半劑量的阿加糖酶β(0.5 mg/kg)優於全量(1.0 mg/kg)直至給藥後24小時；但是在皮膚和PBMC中的酶活性在第7和14天的相反也是真實的(1.0 mg/kg>0.5 mg/kg)。總結該等結果的表顯示在圖10中。
    對於單獨使用阿加糖酶β，在所有時間點，所有病人相對于基線都具有PBMC α-Gal A活性的增加，但是在0.5 mg/kg輸注之後，在第2天有2位病人相對于基線具有皮膚α-Gal A活性的下降。 實例3 使用米加司他鹽酸鹽和阿加糖酶治療法布裡病的給藥方案
    下列實例係在實例2中描述的本研究的一更新。對於總共七位受試者而言，本實例包括一位另外的受試者。
    本實例的目的係評估在診斷為法布裡病的男性中與ERT(阿加糖酶)聯合給予的兩個劑量的米加司他鹽酸鹽(150 mg和450 mg)的安全性和PK。
    這係一項正在進行的、標籤開放的、非隨機的、2階段的、固定順序的研究。階段1包括3個時期。
    ‧ 時期1：單獨靜脈輸注ERT。
    ‧ 時期2：靜脈輸注ERT(以與時期1相同的劑量)之前2小時口服給予米加司他鹽酸鹽(150 mg)。
    ‧ 時期3：單獨口服給予米加司他鹽酸鹽150 mg。
    適宜病人18至65歲的患有法布裡病的男性。
    納入標準
    ‧ 身體質量指數(BMI)在18-35之間。
    ‧ 在給藥之前至少1個月開始用阿加糖酶治療。
    ‧ 篩查時估計肌酐清除率(CLcr)50 mL/min。
    排除標準：
    ‧ 在篩查之前3個月之內證實短暫性腦缺血發作、缺血性發作、不穩定性心肌梗死。
    ‧ 臨床顯著不穩定心臟疾病。
    ‧ 對亞氨基糖類(例如麥格司他，米格列醇)敏感或與之進行同時治療。
    受試者接受他們的一次輸注單獨的阿加糖酶β的當前劑量和方案(0.5或1.0 mg/kg，大約2小時)，之後在下次輸注阿加糖酶β之前2小時給予口服米加司他鹽酸鹽150 mg。
    當前的七位受試者中的五位接受每兩週一次0.5 mg/kg，七位受試者中的兩位接受每四周一次1.0 mg/kg的劑量。
    在階段2，研究了450 mg劑量的米加司他鹽酸鹽。
    階段1和2將在具有阿加糖酶α的ERT輸注(0.2 mg/kg持續大約40分鐘)的獨特受試者中進行重複。
    樣品
    連續取血樣直至給藥後24小時，用於檢測每個時期的血漿α-Gal A活性和蛋白水平。給藥前和服藥後的第1、2、7和14天的每個時期採取了血樣，用於檢測外周血單核細胞(PBMC)中的α-Gal A活性。使用標準非房室程式(WINNONLIN版本5.0或更高)計算藥代動力學參數。
    使用4-甲基傘形酮-α-D-吡喃半乳糖苷(4-MUG)藉由螢光酶分析來檢測血漿、皮膚和PBMC溶解物中的α-Gal A活性。在連續稀釋以解離米加司他之後，體外檢測了α-Gal A對4 MUG的活性。
    使用抗人α-Gal A抗體在血漿樣品上進行α-Gal A蛋白的Western印跡法分析。運行rh-Gal A(阿加糖酶)標準曲線來計算每個樣品中的α-Gal蛋白的適當濃度。
    安全性參數包括不良事件(AE)、生命體征、臨床實驗室試驗(血液學、血清化學和尿檢查)、心電圖(ECG)、體格檢查以及合併用藥的使用。
    結果得到了針對階段1的時期1和2的初步結果。
    病人配置和人口統計針對來自階段1的時期1和2的血漿、皮膚和PBMC α-Gal A活性評估了七位病人。
    ‧ 所有七位病人在時期1過程中接受了單獨的阿加糖酶β；所有病人在時期2過程中在開始給予阿加糖酶β之前2小時聯合給予了150mg的米加司他鹽酸鹽。
    ‧ 兩位病人(標記為受試者A和B)接受了2個小時持續時間的1.0 mg/kg阿加糖酶β的靜脈輸注。
    ‧ 五位病人(標記為受試者C、D、E、F和G)接受了2個小時持續時間的0.5 mg/kg阿加糖酶β的靜脈輸注，有一位例外：受試者E在時期2過程中輸注了2小時40分鐘，但是在時期1過程中輸注了2小時。
    ‧ 所有的受試者均是44-61歲的患有法布裡病的男性，身體質量指數(BMI)範圍在20.9-29.1 kg/m2，並且估計CLcr在54-88 mL/min的範圍內。每位受試者的基因型呈現於圖11中。
    安全性：
    迄今為止，已經報導了12個不良事件(AE)，其中一個係嚴重的。該嚴重的AE係短暫性腦缺血發作(TIA)，發生在篩查隨訪之後，但是在給藥之前，其嚴重性為中等，需要住院治療，並且被研究者認為與研究藥物無關。該TIA已經解決沒有後遺症。所有其他AE的嚴重性較弱，均都被認為與研究藥物無關，並且大部分沒有治療而解決。三位不同受試者中的三個AE還在持續：心房早期收縮、心房撲動和下肢浮腫，均與研究藥物無關。
    血漿α-Gal A活性
    相比單獨用1.0 mg/kg阿加糖酶β治療以及用1.0 mg/kg阿加糖酶β與150 mg米加司他鹽酸鹽聯合治療的α-Gal A活性的血漿AUC(曲線下面積)(具有插入均值和標準差)，針對受試者A和B的活性-時間曲線顯示於圖12中。與1.0 mg/kg阿加糖酶β單一療法相比，1.0 mg/kg阿加糖酶β與150 mg米加司他鹽酸鹽聯合治療針對受試者A和B分別導致α-Gal A活性增加2.2倍和1.6倍。
    相比單獨用0.5 mg/kg阿加糖酶β治療以及用0.5 mg/kg阿加糖酶β與150 mg米加司他鹽酸鹽聯合治療的α-Gal A活性的血漿AUC(曲線下面積)(具有插入均值和標準差)，針對受試者C-G的活性-時間曲線顯示於圖13中。與0.5 mg/kg阿加糖酶β單一療法相比，0.5 mg/kg阿加糖酶β與150 mg米加司他鹽酸鹽聯合治療導致α-Gal A活性增加2.0倍至4.2倍。
    相對於單獨的酶替代療法(ERT)，聯合給藥的大部分受試者在所有時間點的血漿α-Gal A活性都增加了，除了一個例外。受試者E接受了不平衡輸注，時期2過程中長了40分鐘，引起輸注時期過程中相對降低的酶活性。然而，相對於單獨的ERT，受試者E的所有時間點的峰後活性都增加了。另外，與Eng等人，Am.J.Hum.Genet.68：711-722(2001)一致，對於α-Gal A活性，暴露以非線性方式增加。
    相對於單獨的ERT(時期1)，對於米加司他鹽酸鹽聯合給予(時期2)，所有受試者具有血漿α-Gal A活性AUC的增加，如在圖12和13中所示。對於0.5 mg/kg阿加糖酶β，在血漿α-Gal A活性AUC方面的均值增加為3.0倍。排除具有不平衡輸注持續時間的2.0倍的病人，均值增加為3.2倍。對於1.0 mg/kg阿加糖酶β，在血漿α-Gal A活性AUC方面的均值增加為1.9倍。
    皮膚α-Gal A活性
    圖14顯示了與單獨的酶單一療法治療相比，用0.5 mg/kg或1.0 mg/kg阿加糖酶β聯合150 mg米加司他鹽酸鹽治療的受試者在第2天的皮膚樣品中的α-Gal A活性增加了。圖15顯示了在單一治療和用阿加糖酶β與150 mg米加司他鹽酸鹽聯合治療之後在第7天的皮膚樣品中的α-Gal A活性。觀察到以下的在皮膚α-Gal A活性方面的均值增加：對於0.5 mg/kg阿加糖酶β在第2天和第7天分別增加2.6倍和1.4倍(N=5)，以及對於1.0 mg/kg阿加糖酶β在第2天和第7天分別增加1.9倍和1.5倍(N=2)。
    PMBC α-Gal A活性
    觀察到以下的在PBMC α-Gal A活性方面的均值增加：對於0.5 mg/kg阿加糖酶β在第2、7和14天分別增加2.4、1.9和2.1倍(N=5)，以及對於1.0 mg/kg阿加糖酶β在第2、7和14天分別增加1.8、4.8和3.5倍(N=2)。
    Western印跡法分析
    藉由Western印跡法分析7位病人中的5位的時期2(聯合給藥)/時期1(單獨的ERT)AUC比率，觀察到血漿α-Gal A蛋白沒有變化。然而，相對於單獨的ERT，2位受試者(接受了0.5 mg/kg阿加糖酶β的受試者C，接受了1.0 mg/kg阿加糖酶β的受試者G)在聯合給藥之後的蛋白質的量增加了20%(數據沒有顯示)。
    結論
    150 mg米加司他與0.5 mg/kg阿加糖酶β和1.0 mg/kg阿加糖酶β的相互作用導致血漿、皮膚和PBMC中的α-Gal A活性增加。150 mg米加司他鹽酸鹽與阿加糖酶β聯合給藥通常是安全和良好耐受的。
    ***
    本申請並不限於在此說明的具體的實施方式的範圍。實際上，除了在此說明的那些以外，根據前述說明和附圖對本申請的各種修改對於本領域的技術人員而言是顯而易見的。該等修改預期落入隨附的申請專利範圍的範圍之內。
    應當進一步理解的是，所有的數值都是近似值，僅為了描述的目的而提供。
    貫穿本申請引用了專利、專利申請、出版物、產品描述以及方案，出於所有目將該等揭露的全部內容藉由引用結合在此。
    权利要求:
    Claims (16)
    [1] 一種治療受試者體內的法布裡病之方法，該方法包括向對其有需要的病人給予從大約50 mg至大約600 mg的1-去氧半乳糖野尻黴素和有效量的α-Gal A酶替代療法。
    [2] 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中所給予的1-去氧半乳糖野尻黴素的量係大約150 mg至大約450 mg。
    [3] 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中所給予的1-去氧半乳糖野尻黴素的量選自大約150 mg、大約300 mg和大約450 mg。
    [4] 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中病人在給予1-去氧半乳糖野尻黴素開始之前大約0.5至大約4小時以及在結束之後大約0.5至大約4小時的一段時間內禁食。
    [5] 如申請專利範圍第4項所述之方法，其中病人在給予1-去氧半乳糖野尻黴素之前至少大約2小時和給予之後至少大約2小時禁食。
    [6] 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中1-去氧半乳糖野尻黴素係在給予α-Gal A酶替代療法的同時至給予α-Gal A酶替代療法之前大約4小時給予的。
    [7] 如申請專利範圍第6項所述之方法，其中1-去氧半乳糖野尻黴素係在給予α-Gal A酶替代療法之前大約2小時給予的。
    [8] 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中1-去氧半乳糖野尻黴素係米加司他鹽酸鹽。
    [9] 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中α-Gal A酶替代療法選自阿加糖酶α和阿加糖酶β。
    [10] 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中1-去氧半乳糖野尻黴素係作為α-Gal A酶替代療法的佐藥而給予的。
    [11] 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中1-去氧半乳糖野尻黴素與α-Gal A酶替代療法係作為聯合療法而給予的。
    [12] 如申請專利範圍第6項所述之方法，其中1-去氧半乳糖野尻黴素的第二劑量係在給予α-Gal A酶替代療法與其後大約4小時之間給予的。
    [13] 如申請專利範圍第7項所述之方法，其中1-去氧半乳糖野尻黴素和α-Gal A酶替代療法每1至4周給予一次。
    [14] 如申請專利範圍第13項所述之方法，其中1-去氧半乳糖野尻黴素和α-Gal A酶替代療法每2周給予一次。
    [15] 一種用於治療受試者體內的法布裡病之藥盒，該藥盒包括從大約50 mg至大約600 mg的1-去氧半乳糖野尻黴素和有效量的α-Gal A酶替代療法。
    [16] 如申請專利範圍第15項所述之藥盒，其中1-去氧半乳糖野尻黴素的量選自大約150 mg、大約300 mg和大約450 mg。
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    同族专利:
    公开号 | 公开日
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    EP2683382B1|2020-04-22|
    EP3698792A1|2020-08-26|
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    2020-03-01| MM4A| Annulment or lapse of patent due to non-payment of fees|
    优先权:
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